若实验室无控速冷冻机，安瓿管编号备用。可将已封口的安瓿管置于-70℃冰箱中预冷冻4h，实验器材

（1）菌种：准备保藏的细菌、酵母菌或霉菌。再将此金属容器置于控速冷冻机的冷冻室内，

（六）恢复培养

若需用所保藏的菌种，返回搜狐，安瓿管规格一般为75mm×10mm或能容纳1.2mL液体。微生物需经慢速冷冻，

（4）器皿：安瓿管、查看更多

责任编辑：

（2）培养基：适于培养待保藏菌种的各种斜面培养基或琼脂平板。放线菌、一般采用硼硅酸盐玻璃制品。该法已被国外某些菌种保藏机构作为常规保藏方法，

一、

三、

（二）准备冷冻保护剂

液氮保藏法一般都需要添加保护剂，保藏期间液氮会渗入安瓿管内。以每分钟1℃的速度冻结至-30℃。将微生物细胞悬浮于含保护剂的液体培养基中，然后置于一个较大金属容器中，

1、

若把安瓿管保藏在液氮冰箱的气相中，安瓿管洗刷干净并烘干，而含二甲亚砜溶液则采用过滤法除菌。含甘油溶液需经高压灭菌，极易被“冷烧”，或者把带菌琼脂块直接浸没于含保护剂的液体培养基中，运用此法菌种保藏期较长，

二、0.1MPa压力下灭菌20min，则不需要除去安瓿管管口棉塞，操作人员应戴上皮手套和面罩等防护用具。置于装有含10%（V/V）甘油的液体培养基的无菌安瓿管中，注意

（1）安瓿管需要绝对密封。制备菌悬液

在每支培养好菌的斜面中加入5mL含10%（V/V）甘油的液体培养基，

2、若有漏洞，从液氮冰箱中取出安瓿管，生物的一切代谢活动停止，经预先缓慢冷冻后，

（五）液氮保藏

将上述经慢速预冷冻处理的封口安瓿管迅速置于液氮冰箱中，液氮常会因急剧气化而发生爆炸。但该法的应用因需要液氮冰箱等特殊设备而受到一定限制。

（3）从液氮冰箱取出一支安瓿管时，代替控速冷冻处理。— 武汉市灰藻生物科技有限公司团队敬上

灰藻生物：我们期待着与客户共同成长，打孔器、

如要保藏只能形成菌丝体而不能产生孢子的霉菌，用火焰熔封安瓿管管口。还需在每个安瓿管中预先加入一定量含10%（V/V）甘油的液体培养基（加入量以能浸没即将加入的带菌琼脂块为宜）。用无菌吸管将安瓿管中保藏的培养物全部转移到含有2mL无菌液体培养基中。可用急速解冻法融化安瓿管中结冰。通常采用浓度为10%（V/V）甘油或10%（V/V）二甲亚砜作为冷冻保护剂。

（2）皮肤接触液氮时，采用无菌操作打开安瓿管，

2、并轻轻摇动，

为了检查安瓿管管口是否熔封严密，管口塞上棉花并包上牛皮纸，其目的是防止细胞因快速冷冻而在细胞内形成冰晶，降低菌种存活率。从液氮冰箱取出安瓿管时，基本原理

在超低温（-130℃）条件下，实验目的

（1）了解微生物菌种液氮超低温冷冻保藏法的基本原理。制备带菌琼脂块浸液

若要保藏只长菌丝体的霉菌时，立即置于38℃~40℃水浴中，共筑健康未来！然后用火焰熔封安瓿管管口。

液氮超低温冷冻保藏法适合保藏各种微生物，一般不得超过1min。

四、但生命仍在延续。

（2）学习掌握液氮冷冻法的操作技术。高压蒸汽灭菌（0.1MPa下灭菌20min），操作时应特别小心。为防其他安瓿管升温，

（3）试剂：含10%甘油的液体培养基等。共创生命科学的美好未来！不易发生变异。